CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE A HAUTE PERFORMANCE COUPLEE AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE (LC-MS, LC-MS/MS) – APPLICATION A L’ANALYSE DES PETITES MOLECULES
Sciences analytiques
Objectifs
Acquérir et approfondir les connaissances théoriques et pratiques des couplages de chromatographie en phase liquide et spectrométrie de masse.
Développement et optimisation de méthodes couplées appliquées à différents domaines : agro-alimentaire, environnement, santé…
Contenu pédagogique
THEORIE
Rappel rapide de chromatographie en phase liquide haute performance (HPLC)
Révision des principes généraux et grandeurs fondamentales de la chromatographie en phase liquide
Présentation des différents appareillages
Optimisation d’une méthode de séparation ou comment identifier les paramètres et les contraintes liés à la substance (nature, propriété physico-chimique, stabilité) et à la méthode analytique (sélectivité, sensibilité)
Spectrométrie de masse : principes fondamentaux nécessaires à la réalisation d’un couplage
Description générale d’un spectromètre de masse :
– Les différents modes d’ionisation et sources (APCI, Electrospray, MALDI)
– Les analyseurs (Quadripôle, triple quadripôle, ToF et QqToF, QTrap)
Définition de la résolution, principes des spectres MS – MS :
– Différentes stratégies de couplage : LC-MS, LC-MS/MS, LC-MS Haute Résolution
– Choix de la stratégie, de l’analyseur
Marche à suivre pour le développement d’une méthode couplée
Aspects techniques et pratiques du développement d’un couplage LC-MS
Optimisation d’une méthode LC-MS
Paramètres de détection, de source, séparation
Comment identifier les paramètres et les contraintes liés à la matrice (complexité, effet de matrice, préparation d’échantillon) ?
Traitement de données – quantification
Pertinence des résultats
Différentes normes – Différents critères
études de cas
Identification des différentes étapes de développement et des paramètres clés à optimiser dans plusieurs exemples tirés de la littérature
TRAVAUX PRATIQUES sur un couplage LC-MS Haute Résolution
Présentation de l’appareillage
Calibration (externe, externe proche, interne)
Différentes sources (ESI, APCI, DIP) et différents modes d’acquisition
Logiciel de retraitement
Travaux pratiques sur un couplage LC-MS/MS
Présentation de l’appareillage
Infusion et couplage
Différents modes d’acquisition
Logiciel de retraitement