INITIATION THEORIQUE ET PRATIQUE A LA TECHNIQUE PCR – POLYMERASE CHAIN REACTION
Biotechnologies
Objectifs
S’initier à la technique de la PCR.
Présenter les différentes applications de cette technique.
Cette session théorique et pratique présente des rappels fondamentaux en biologie moléculaire mais il est recommandé que les participants aient déjà des connaissances de base en biologie moléculaire.
Contenu pédagogique
THÉORIE
Rappels fondamentaux de biologie moléculaire
Technique PCR
- Principe
- Généralités
- Rappels sur les acides nucléiques
- Cycles de la réaction
- Plateau
- Détection des produits amplifiés
- Paramètres
- ADN polymérase thermorésistantes (Taq pol…)
- Amorces
- dNTP
- Mg2+
- Autres paramètres
- PCR inverse
- Faux positifs
- Faux négatifs
- Echantillon
Différentes applications de la PCR
TRAVAUX PRATIQUES
- PCR multiplex avec une révélation en point final : extraction d’ADN, contrôle des ADN extraits, préparation des mix d’amplification, réalisation PCR (amplification), contrôle de l’amplification par électrophorèse en gel d’agarose