METHODE qPCR
Biotechnologies
Objectifs
Apporter les fondements et les principes de la méthode qPCR
Illustrer les applications de cette méthode
Mettre en œuvre la méthode
Contenu pédagogique
THEORIE
Bases moléculaires de la PCR
Limites de la PCR en point final et réponse de la PCR en temps réel
Détermination de la phase « quantitative » de la PCR
Gamme d’étalonnage en nombres de copies : une nécessité
PCR en temps réel
Quantification du nombre de copies d’ADN avant amplification
Détection des produits d’amplification
Sensibilité et spécificité
Etapes essentielles dans la mise au point d’une quantification d’ADN par PCR en temps réel
Familles de thermocycleurs
Avantages et inconvénients
Plateforme de RT et qPCR
Principe de « marche en avant » et « Bonnes Pratiques de Laboratoire »
Les recommandations « MIQE »
Minimum Information for publication of Quantitative real-time PCR Experiments
Applications de la PCR en temps réel
A La quantification de transcrits dans les analyses d’expression relative de gènes d’intérêt : RT-qPCR quantitative ou relative ?
Atouts des étalons externes non compétitifs
A l’agro-alimentaire
A la virologie
PCR multiplex
Avantages et inconvénients
TRAVAUX PRATIQUES
Réalisation d’une analyse
Discussions de cas pratiques partagés par les participants